第八百七十五章 蒲地藍消炎口服液（1）(第2/2頁)

也就是對照組、模型組、拜阿司匹林組(200毫克千克、蒲地藍消炎口服液低劑量組(1.3毫升千克、蒲地藍消炎口服液中劑量組(3.9毫升千克、蒲地藍消炎口服液高劑量組(11.7毫升千克。

拜阿司匹林組和蒲地藍消炎口服液各劑量組給予相應劑量藥物，每日1次，連續5d，空白組和模型組灌胃等體積的生理鹽水。

末次給藥1小時後，除空白組外，其餘各組構建急性肺炎模型。

即使用異氟烷麻醉小鼠後，用脂多糖(2毫克千克給小鼠滴鼻造模，空白組滴入相同體積生理鹽水，造模12小時後進行取材。

各組小鼠摘眼球取血，解剖並取左肺中葉用百分之10甲醛溶液固定，石蠟包埋後進行小時E染色，分裝部分血清用於檢測IL10、TNFα和NFκB的含量，剩餘血清置於80攝氏度儲存，進行後續代謝組學檢測。”

鍾醫喘了一口氣，繼續說道。

“其次，是溶液的配製。

精密稱取丙酮酸、乳酸、琥珀酸、富馬酸、蘋果酸、α酮戊二酸、磷酸烯醇式丙酮酸、順式烏頭酸、3磷酸甘油酸、檸檬酸、異檸檬酸和葡萄糖對照品，溶解成1毫克毫升的對照品儲備液。

精密量取上述對照品儲備液分別稀釋成4、120、16、0.1、0.5、1、0.02、0.01、0.04、2.5、0.16、240微克毫升的對照品溶液，4攝氏度儲存。

精密稱取1，肉豆蔻酸適量置於10毫升容量瓶中，加甲醇稀釋溶解，配製成1毫克毫升的內標儲備液，4攝氏度儲存。

吸取內標儲備液適量，加入甲醇稀釋成濃度為5微克毫升的內標工作液。

然後是樣本前處理及衍生化反應。

取50微升血清，加入200微升預冷的含1，213C2肉豆蔻酸(5微克毫升的甲醇溶液，渦旋3分鐘，4攝氏度離心10分鐘(14000r分鐘。

同時，取上清液100微升置30攝氏度真空濃縮儀揮幹2小時，加10毫克毫升甲氧胺吡啶30微升，渦旋5分鐘，30攝氏度振盪1.5小時。

繼續加入30微升BSTFA，渦旋5分鐘，37攝氏度振盪半小時，最後將樣品4攝氏度離心10分鐘，14000r分鐘，取上清進樣。

最後，分析條件色譜條件:載氣為氦氣，流速1.2毫升分鐘，採用分流進樣，分流流速為24.0毫升分鐘，分流比為20∶1。

&n×0.25mm×0.25μm，進樣口溫度300攝氏度。

升溫程式:60攝氏度保持1分鐘，以20攝氏度分鐘升至320攝氏度，保持5分鐘。

質譜條件:EI電離源，電子能量為70eV，離子源溫度為300攝氏度，傳輸線溫度為300攝氏度。溶劑峰延遲時間為3.8分鐘。

&nz50~500。

各代謝物靶向定量測定採用選擇反應監測(SRM模式，碰撞氣為高純氬氣(99.999%。

質譜引數最佳化吸取一定量的各代謝物的儲備液和內標儲備液進行混合，用甲醇稀釋並揮幹，採用衍生化條件進行衍生化並進樣，採用全掃模式，對代謝物進行測定，確定各代謝物及內標的出峰時間。

然後，我們再採用TSQ8000的AutoSRM分析模式自動最佳化質譜儀分析引數，最佳化後的各物質引數是……”

“是什麼？”楊光好奇又迫切地問道。